Expression, purification and characterization of a synthetic gene encoding human amyloid beta (Abeta1-42) in Escherichia coli.

Alzheimer's disease (AD) is a neurodegenerative disorder characterized by a progressive loss of cognitive function. Existing evidence indicates that abnormal processing and extracellular deposition of the longer form of the amyloid peptide Abeta(1-42), a proteolytic derivative of the amyloid precursor protein (APP), is a key step in the pathogenesis of AD. Active immunization with Abeta(1-42) has been shown to decrease brain beta deposition and improve cognitive performance in mouse models of AD. In the present study, we sought to express the synthetic gene encoding AB in Escherichia coli to enable rapid production of the antigen and its purification. The synthetic gene has been constructed from six oligonucleotides by employing overlapping PCR strategy and expressed in E. coli using the T7 promoter system. The recombinant peptide has been purified to homogeneity by a single step Ni+2 affinity chromatography. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) using polyclonal anti-Abeta(1-42) sera confirms that the corresponding linear B-cell epitopic sequences are available for immunorecognition in the recombinant peptide. This methodology enables rapid, continuous production and purification in bulk amounts of human Abeta sequence by employing bacterial expression system

Alzheimer disease: 100 years later

Después de transcurrido casi 100 años desde la primera publicación de un caso de enfermedad de Alzheimer (EA), se han podido identificar genes que determinan formas clínicas precoces y tardías de esta enfermedad. Mientras que ciertas mutaciones de baja frecuencia en los genes que determinan EA precoz (proteína precursora del amiloide y las presenilinas 1 y 2) llevan a una producción aumentada de formas específicas de la proteína ß amiloide beta (ßA), polimorfismos frecuentes en los genes que se asocian a EA tardía (apolipoproteína E y a2-macroglobulina) alterarían la depuración y degradación de ßA en el cerebro. Aunque todavía no existe prueba definitiva para una relación causal directa entre una producción y/o remoción alterada de ßA y neurodegeneración, las aproximaciones terapéuticas de EA están orientadas al descubrimiento de nuevas drogas que permitan disminuir los niveles patológicos de ßA. El reciente descubrimiento de las enzimas (secretasas) responsables de la generación de ßA ha abierto el camino para el desarrollo de tales drogas, aumentando las perspectivas para una intervención terapéutica más exitosa sobre la EA